1970-01-01
随着PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂上市，临床和患者对PD-L1免疫组化检测的需求日益迫切。
广东省人民医院病理医学部主任
《中华病理学杂志》及《诊断病理学杂志》编委
中国抗癌协会肿瘤病理专委会候任主委
淋巴瘤专委会常委
中国临床肿瘤协会肿瘤病理专委会常委
淋巴瘤联盟专委会、肿瘤生物标志物专委会及胃肠间质瘤专委会委员
中华医学会病理学分会淋巴瘤学组及分子病理学组委员
肿瘤学分会淋巴瘤学组副组长
中国医师协会病理学分会分子病理专委会副主委
研究型医院学会病理学分会副主委
卫健委病理质控中心免疫组化和分子病理质控工作组成员
中国合格评定国家认可委员会医学实验室ISO15189 技术评审员
广东省临床基因检测质量控制中心副主任
广东省抗癌协会肿瘤病理专委会主任委员
病理医学部 广东省人民医院（广东省医学科学院）
2018/4-2019/4美国纪念斯隆凯特琳癌症中心（MSKCC）访问学者
中国抗癌协会肿瘤病理学专业委员会肺癌病理学组委员
中国研究型医院学会病理学专业委员会青年副主委
全国卫生产业企业管理协会实验医学专业委员会病理专家委员会委员
广东省医师协会病理科医师分会委员
广东省医学会病理学分会数字与分子学组委员
主持国家自然科学基因青年基金、广东省自然科学基因博士启动基金、广东省医学科学技术研究基金项目各一项
共发表SCI论文22篇，IF=106；其中第一作者论文7篇，IF=36
药物相关PD-L1检测商业化试剂盒和检测平台有多种（表1），每一种药物对应一种检测（表2）。但是，目前国内尚无PD-L1检测试剂盒上市。即使在未来有上市的试剂盒可以使用，我们仍然面临诸多困难。例如，难以在同一中心或医院建立全部的药物对应的PD-L1免疫组化检测项目；难以在国内医院广泛建立试剂盒相应的全自动检测平台。实验室自建检测（LDTs）是一种可行的解决目前国内临床急需但尚无相关产品上市的问题。
目前我国对LDTs的概念和范围尚没有明确的定义和界定。美国病理学家协会（CAP）关于临床实验室自建检测项目的指南要求实验室在测试病人标本之前，需要验证所有的检测项目。实验室必须有书面的程序性文件，文件规定验证方案，何时需要重新验证。LDTs验证有助于避免与分析假阳性和假阴性测试结果相关的潜在危害，从而为免疫组化测试的总体性能和安全性提供保证。
本文将就实验室自建PD-L1免疫组化检测项目的性能确认方法进行详细介绍。
表1. 商业化PD-L1免疫组化检测试剂盒、检测平台及染色方案[1]
表2. 肿瘤类型和获批药物所对应的FDA批准的或CE标记的伴随或补充PD-L1检测[2,3]
实验室自建检测方法学确认
1. LDTs方法学确认方案[4, 5]
将自建测试结果与标准测试（gold standard test）结果进行比较。如果得分属于同一类别的TPS或CPS，则每个案例都被认为是一致的。实验室应在自建测试与标准测试之间取得至少90%的总体一致性。如果一致性小于90%，实验室需要查找一致性低的原因。
2. 标准测试
首先明确承担标准测试的实验室、试剂、平台和玻片评价的病理医生。推荐具有检测资质的病理实验室，使用国家（或国外）FDA认证的PD-L1免疫组化检测试剂盒（drug-combined kit），在相应平台（drug-combined platform）对相同组织验证集进行检测。
3. 测试评价
由三位经过培训的病理学家组成的小组评估两种方法的一致性。
4. 验证集
考虑到临床相关阈值，应包括阳性、阴性和弱阳性组织标本，应反映分析的预期用途。标本应为PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂适应证的肿瘤组织标本。
5. 检测条件的优化（Optimization）
5.1 试剂信息：一抗（一抗名称、克隆号、生产商、一抗浓度、批号），免疫组化检测试剂盒信息（名称、生产商、批号）。
5.2 全自动免疫组化检测平台：厂家、型号。
5.3 优化实验条件：一抗稀释度、一抗孵育时间、一抗孵育温度、全自动免疫组化检测平台实验程序、酶及其他。
5.4 结果评价：包括检测技术人员评价和病理医师评价。
6. 灵敏度（Sensitivity）
6.1 灵敏度定义：敏感性验证确定抗原存在时检测阳性率。
6.2 阳性验证集：应为药物适应证相应的肿瘤组织标本，包括PD-L1高表达和低表达标本。病例量：至少20例。
6.3 阳性率区间：验证集中的阳性病例应跨越预期的临床结果范围。阳性病例划分应根据PD-L1获批适应证的阈值设定。
6.4 评价标准：阳性一致率≥90%视为合格。
7. 特异性（Specificity）
7.1 特异性定义：特异性验证确定抗原不存在时的检测阴性率。
7.2 阴性验证集：至少包括适应证阴性肿瘤组织标本和肿瘤原发部位/器官和常见转移部位/器官的正常组织标本。
7.3 评价标准：阴性一致率≥90%视为合格。
8. 精密度（Precision）
8.1 精密度定义：精密度包括批内精密度（Intra-assay precision）和批间精密度（Inter-assay precision）。
8.2 批内精密度：确定在同一批次检测中使用相同的样品重现相同测试结果的能力（重复性）。 通过在同一检测批次内对来自同一病例的三张连续组织切片进行染色来评估批内精密度。批内精密度测试用于确保单独运行内的一致性。
8.3 批间精密度：确定在不同批次检测中使用相同的样品重现相同测试结果的能力（重复性）。 通过三个不同检测批次分别对同一病例的三张连续组织切片进行染色来评估批间精密度。批间精密度测试用于确保单独运行之间的一致性。
8.4 病例量：至少5例独立病例，至少应包括PD-L1高表达、低表达和阴性标本。
8.5 评价标准：各区间检测结果的一致率均应不小于95%。
9. 稳定性（Stability）
9.1 效期稳定性：试剂盒在规定的贮存条件下保存至有效期末，超过有效期一定时期内（推荐1个月）进行检测，产品的性能应至少符合6、7、8要求。（注释：目前国内外就 “超过有效期一定时期”尚没有明确、统一的时间界定，我们推荐按照实际工作情况界定合理期限）
9.2 开封稳定性：试剂盒开封之后，在规定的贮存条件下保存至开封有效期末，超过有效期一定时期内（推荐1个月）进行检测，产品的性能应至少符合6、7、8要求。
缩略词：LDTs，laboratory-developed tests；PD-1，programmed cell death protein 1；PD-L1，programmed cell death-ligand 1；CAP，College of American Pathologists；TPS，tumor proportion score；CPS，Combined Positive Score
1. Schats, K.A., et al., Optimal Evaluation of Programmed Death Ligand-1 on Tumor Cells Versus Immune Cells Requires Different Detection Methods. Arch Pathol Lab Med, 2018. 142(8): p. 982-991.
2. Savic Prince, S. and L. Bubendorf, Predictive potential and need for standardization of PD-L1 immunohistochemistry. Virchows Arch, 2019. 474(4): p. 475-484.
3. US Food and Drug Administration: Devices @ FDA, PD-L1. https://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/devicesatfda/index.cfm. . Accessed June 28 2018.
4. Vigliar, E., et al., PD-L1 expression on routine samples of non-small cell lung cancer: results and critical issues from a 1-year experience of a centralised laboratory. J Clin Pathol, 2019. 72(6): p. 412-417.
5. Koppel, C., et al., Optimization and validation of PD-L1 immunohistochemistry staining protocols using the antibody clone 28-8 on different staining platforms. Mod Pathol, 2018. 31(11): p. 1630-1644.
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