近日，在第十二届中国病理医师年会召开之际，中国人民解放军总医院石怀银教授、南京大学医学院附属鼓楼医院樊祥山教授、天津医科大学肿瘤医院孟斌教授等专家共同出席了罗氏诊断的卫星会，围绕微卫星不稳定性（MSI）及EBV检测在病理诊断中的价值与应用等话题进行了深入的解读和探讨。

石怀银教授担任会议主席并指出：随着精准诊疗时代的到来，临床对病理检测的要求也越来越高，精确、高效、规范的病理诊断至关重要——病理及临床医生有必要了解相关鉴别及预后标志物的临床意义，通过精准检测综合分析肿瘤的不同病理类型、基因突变情况、不同分期及患者个人状况等，制定出个体化诊疗方案，提升治疗效果。

微卫星又称简单重复序列（SSR），是一些短而重复的DNA序列，一般由1～6个核苷酸组成，串联重复排列。DNA复制时插入或缺失突变引起的微卫星序列长度改变的现象，常由错配修复（MMR）功能缺陷引起，称为微卫星不稳定性（MSI）。MSI现象于1993年被Jacobs等人在结直肠癌中首次发现。越来越多的研究表明，MSI与子宫内膜癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、肝细胞癌、黑色素瘤等肿瘤的发生密切相关，是评估结直肠癌治疗效果、预后以及制定辅助治疗方案的重要生物标志物。

“林奇综合征属于最常见的遗传性结直肠癌，发病年龄较年轻且患者预后较好，因此应对新诊断的结直肠癌患者进行林奇综合征筛查，并对于高度怀疑为林奇综合征患者及其亲属进行相关基因胚系突变检测来证实，以实现早筛查、早诊断、早治疗的目的。”樊祥山教授表示，“近年来，免疫治疗相关研究发现，当肿瘤细胞中存在 MMR 缺失（dMMR）/MSI时，肿瘤细胞内将累积大量基因突变，某些突变（新抗原）有可能被免疫系统识别和攻击，从而对PD-1免疫治疗有较好的应答。因此，MSI/MMR检测除了可提供关键性诊断及预后信息外，对于预测PD-1单抗免疫治疗在癌细胞治疗中的效益也具有重要价值。”

美国国立综合癌症网络（NCCN）指南、中国临床肿瘤学会（CSCO）指南均推荐所有结直肠癌患者进行MMR或MSI检测。同时，在2019版更新的NCCN指南中，推荐pembrolizumab用于dMMR/MSI-H结直肠癌、子宫内膜癌等实体肿瘤晚期治疗，推荐nivolumab用于dMMR/MSI-H 结直肠癌晚期治疗。

目前，微卫星不稳定检测方法包括PCR检测MSI、免疫组化检测MMR蛋白及NGS检测。樊祥山教授强调：“综合病理科情况，IHC是病理实验室检测微卫星不稳定的首要筛查手段，建议使用PMS2、MSH6、MLH1和MSH2的抗体套餐来检测MMR状态。对于有条件的实验室，目前常用的MSI检测方法是PCR结合IHC检测，以保证检测精准性。同时，在MMR的免疫组化检测过程中应注意使用规范的判读标准以及内外部对照。”

罗氏诊断VENTANA MLH1(M1)、MSH2(G219-1129)、MSH6(SP93)和PMS2(A16-4)检测使用IHC检测方法辅助识别组织样本中的MMR蛋白，可明确显示每个蛋白质的表达情况，结果快速准确，且与PCR检测之间具有高度关联性。

EB病毒（EBV）是一种嗜人类淋巴细胞的疱疹病毒，在人群中感染非常普遍。EBV感染在不同感染状态表达不同抗原：病毒增殖感染相关抗原包括EBV早期抗原（EA）、EBV壳抗原（VCA）和EBV膜抗原（MA）；病毒潜伏感染时表达的抗原有EBV核抗原（EBNA）和EBV潜伏膜蛋白（LMP），其中LMP包括LMP1、LMP2，是目前唯一证实的EBV恶性转化基因。EBV感染口咽部上皮及局部浸润B淋巴细胞，大量繁殖并进入血液循环而造成全身性感染，并可长期潜伏在人体淋巴组织中，形成记忆B细胞库，当机体免疫功能低下时，潜伏的EBV活化可造成复发感染。EBV感染与多种疾病相关，包括淋巴造血系统和非淋巴造血系统两类。EBV检测除了在熟知的NK/T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌和胃癌等的诊断中使用，在其他一些相关疾病，尤其是EBV感染相关淋巴组织增殖性疾病中的应用不容忽视，在这些疾病中常常造成误诊或漏诊。现阶段可通过血清学检测EBV相关抗体及病毒DNA拷贝数辅助诊断，对于病变组织检测方法主要包括免疫组化（IHC）和原位杂交（ISH），孟斌教授强调：“IHC方法简便易行，可检测LMP1和EBNA1等EBV表达的蛋白抗原，但在不同感染状态这些抗原表达不一，严重影响了检测的敏感性。EBER是EBV表达的小RNA，在EBV各种感染状态下都有表达，因此应用ISH方法检测EBER对诊断EBV感染具有高度敏感性和特异性，是公认的诊断金标准，得到了包括NCCN在内的多个诊疗指南的推荐。”

罗氏诊断Ventana EBER探针采用专用荧光素标记探针，操作方便、检测时间短，通过原位杂交定性染色分析，能帮助临床进行EBV检测并及时得到检测结果；该项检测可在Benchmark机器上进行，所有步骤均由程序自动化控制，全封闭运行，不受人为因素干扰，保证了结果的可重复性，有利于质量标准化管理，值得在临床上推广使用。