作者：梁艳，崔磊，肖漓，刘晓，阳幼荣，凌彦博，王瞳，王兰，王杰，吴雪琼

第一作者及单位：梁艳、崔磊、肖漓：解放军总医院第八医学中心结核病医学部，全军结核病防控重点实验室/结核病诊疗新技术北京重点实验室

通信作者及单位：吴雪琼：解放军总医院第八医学中心结核病医学部，全军结核病防控重点实验室/结核病诊疗新技术北京重点实验室

Immunotherapeutic Effects of Different Doses of Mycobacterium tuberculosis ag85a/b DNA Vaccine Delivered by Electroporation 

Liang Y, Cui L, Xiao L, Liu X, Yang Y, Ling Y, Wang T, Wang L, Wang J, Wu X.

Front Immunol, 2022, 13: 876579.

doi: 10.3389/fimmu.2022.876579.

PMID: 35603155.

研究背景

结核病仍然是重要的全球公共健康问题。2021年，全球有1000万例结核病新发患者，且有128万例死于结核病。结核病的流行对控制结核病提出了新的挑战。牛分枝杆菌卡介苗（BCG)是一种有效的预防儿童结核病的疫苗，但对于预防成人肺结核的效力仍存在争议。因此，开发更有效的疫苗迫在眉睫。鉴于DNA疫苗作为最新的生物技术之一，已经在癌症、人类获得性免疫缺陷综合征（艾滋病）、疟疾和自身免疫病等疾病中显示出了良好的预防和免疫治疗作用。因此，在本研究中，我们率先使用肌肉注射（IM）和电导入（EP）两种技术递送不同剂量的结核分枝杆菌ag85a/b DNA疫苗，并比较其对小鼠结核病模型的免疫治疗效果，为提高未来人体临床试验中结核分枝杆菌ag85a/b DNA疫苗的免疫治疗效果，减少DNA疫苗的使用剂量提供实验依据。

研究方法

用结核分枝杆菌标准株H37Rv菌株悬液经尾静脉注射感染96只6～8周龄SPF级雌性BALB/c小鼠，每只小鼠注射2×104个H37Rv结核分枝杆菌，建立小鼠结核病感染模型。感染后第3天，分别用肌肉注射和电导入两种方式递送10、50、100和200 µg的结核分枝杆菌ag85a/b DNA疫苗对小鼠结核病模型进行免疫治疗。第3次免疫后17～18 d处死小鼠，并摘取小鼠肺和脾脏进行菌落计数，同时做肺组织病理检查；采集小鼠肝素钠抗凝全血，经流式抗体染色等处理后，用流式细胞术检测表达IFN-γ或IL-4的CD4+和CD8+ T 细胞亚群和CD4+CD25+ 和CD4+CD25+FoxP3+ 调节T细胞亚群，以此评价该疫苗的免疫治疗效果。

研究结果

与空白对照组（PBS组）相比，200 µg DNA 肌肉注射组和4个剂量的DNA电导入组全血中CD4+IFN-γ+ T细胞百分比均显著升高（P值均＜0.05），尤以200 µg DNA 电导入组的CD8+IFN-γ+T细胞百分比增加显著（P＜0.05）。50 μg和100 μg DNA 肌肉注射组、100 μg和200 μg DNA 电导入组的CD8+IL-4+T细胞的百分比，以及50 μg DNA肌肉注射组的CD4+IL-4+ T细胞百分比均显著增加（P值均＜0.05）。所有DNA疫苗组的CD4+CD25+Treg细胞百分比均显著降低（P值均＜0.01）。除10 μg DNA 肌肉注射组外，其他7个DNA组的肺部和脾脏细菌栽量均显著下降（P值均＜0.01），特别是100 μg DNA 肌肉注射组和50 μg DNA 电导入组肺细菌栽量和肺部病变较其他DNA组显著减少。

研究结论

综上所述，电导入递送方法的特征是提高疫苗的免疫原性，该技术可能会加快递药技术的进步。本研究证明结核分枝杆菌ag85a/b DNA疫苗可诱导Th1型细胞免疫反应，应用电导入递送能提高低剂量DNA疫苗的免疫原性，同时减少了DNA剂量，对小鼠结核模型具有很好的免疫治疗效果。该研究为未来结核分枝杆菌ag85a/b嵌合DNA疫苗的人体临床试验提供了理论依据。

百度浏览   来源 : 中国防痨杂志期刊社   

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